分离原理
尺寸排阻色谱 (SEC) 是一种色谱技术，主要设计用于根据分子的尺寸分离分子。 虽然 SEC 广泛用于大分子分析，但由于细胞外囊泡 (EV) 的尺寸相对较小，因此它可能不是分离细胞外囊泡 (EV) 的首选方法。 然而，可以进行一些修改以使 SEC 更适合 EV 的分离。
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样品制备
通过离心或过滤去除细胞碎片和大颗粒来制备样品。 此步骤有助于防止 SEC 色谱柱堵塞。
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选择缓冲液
使用适当的缓冲液来维持细胞外囊泡的稳定性。 用于 EV 分离的常用缓冲液包括磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 或 HEPES 缓冲盐水。
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色谱柱校准
使用已知分子量的标准品校准 SEC 柱。 这确保了准确估计分离的囊泡的大小
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样品分离
将准备好的样品加载到 SEC 柱上。 当样品穿过色谱柱时，较小的细胞外囊泡将采用更长的路径穿过多孔基质
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洗脱和收集
收集从柱中洗脱的馏分。 洗脱顺序将基于颗粒的大小，较大的囊泡较早洗脱。
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表征
使用适当的方法（例如纳米颗粒跟踪分析 (NTA)、动态光散射 (DLS)、电子显微镜或其他技术）表征收集的组分，以确认细胞外囊泡的存在和大小分布
值得注意的是，虽然 SEC 可适用于 EV 分离，但还有一些专用方法，例如超速离心、密度梯度离心和专为高效 EV 分离而设计的商业试剂盒。 研究人员应根据自己的具体要求和样本的性质仔细选择方法。 此外，在分离过程中保持细胞外囊泡的完整性对于准确的下游分析至关重要。